Достоверные методы диагностики трихомониаза

Анализы на трихомониаз сдают все, кто обратился к гинекологу, урологу или венерологу с жалобами на зуд и жжение в мочевых или половых путях, выделения с запахом пропавшей рыбы, учащенное мочеиспускание.

Мужчины должны сдать анализ, если наблюдается увеличение и болезненность при пальпации предстательной железы и яичек.

Различия в клинической картине трихомониаза у мужчин и женщин

Симптом	Пол
	Мужчины	Женщины
Выделения	очень скудные	обильные
Боль	в промежности, отдающая в прямую кишку	локализована в нижней части живота
Эрозии, язвы	локализуются на головке пениса	могут опускаться с гениталий на внутреннюю поверхность бедер

Методы лабораторного исследования

Для диагностики трихомониаза используют четыре лабораторных метода обнаружения trichomonas vaginalis:

1. Микроскопический – выявление живых и убитых паразитов в нативных и окрашенных препаратах.
2. Культуральный – золотой стандарт для диагностики трихомониаза. Позволяет выявить паразитов при их незначительном количестве в отделяемом. Чистую культуру трихомонад высевают на дне пробирки, заполненной жидкой или плотной питательной средой.
3. Иммунологический – обнаружение в крови пациента антигенов и антител к трихомонаде.
4. Генодиагностический – обнаружение специфических белков trichomonas vaginalis в биопробах, взятых из уретры или влагалища. Метод используют как экспресс-диагностику трихомониаза.

Возможен и ложноположительный результат, когда в мазок попадают не влагалищные, а ротовые или кишечные трихомонады.

Наиболее точным методом на сегодняшний день считается ДНК-диагностика (ПЦР). Точность этого исследования составляет 95%. ДНК-диагностика позволяет одновременно с трихомонадой выявлять другие патогены: грибки, микоплазмы, бактерии.

Подготовка и забор материала

Диагностика трихомониаза начинается с осмотра половых органов. Врач оценит особенности выделений и воспалительные признаки, которые можно заметить без увеличения и специальной аппаратуры. Иногда во время первичного осмотра измеряют кислотность вагинального секрета. При трихомониазе секрет имеет кислую Ph.

Во время осмотра врач возьмет соскоб для микроскопического исследования. У женщин потребуется взять образцы выделений из влагалища, у мужчин – секрет простаты и слизь из уретры.

Если нет выраженных выделений и воспалительных явлений, потребуется провести более кропотливые и дорогостоящие исследования – посев на флору и ДНК-диагностику.

Для посева используют отделяемое из влагалища или уретры. Для ПЦР-тестирования потребуется отделяемое и эпителиоциты из уретры, влагалища, цервикального канала и других возможных очагов заболевания.

Рассказ специалиста о мазке на ИППП у женщин:

У мужчин, кроме отделяемого уретры, материалом для исследования могут быть выделения из предстательной железы и моча.

Забор биоматериала на ПЦР-исследование у мужчин ведется зондом или ватным тампоном, который вводят внутрь мочеиспускательного канала на 2-3 см. Процедура может сопровождаться болезненными ощущениями.

Врач дерматовенеролок Екатерина Макарова рассказывает о мазке у мужчин:

Кровь сдают утром натощак. Перед процедурой нельзя принимать антибиотики. Перед сдачей крови на иммуноферментный анализ нельзя курить как минимум 30 минут.

ПЦР-диагностика трихомонады (Trichomonas vaginalis)

Выявление возбудителя трихомониаза, в ходе которого определяется генетический материал (ДНК) трихомонады в моче или в образце, полученном из урогенитального тракта.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Соскоб урогенитальный, первую порцию утренней мочи, эякулят.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Женщинам рекомендуется сдавать биоматериал (урогенитальный мазок или мочу) до менструации или через 2 дня после ее окончания. Не следует мочиться в течение 2 часов до сдачи урогенитального мазка. Не подмываться до исследования.
• Мужчинам не следует мочиться в течение 2 часов до сдачи урогенитального мазка или мочи. Не подмываться до исследования.

Общая информация об исследовании

Влагалищная трихомонада – одноклеточный паразитарный микроорганизм, который вызывает инфекционное заболевание – трихомониаз. Она способна обитать в среде с рН 4,9-7,5 и при температуре 35-37 °С. У человека ее можно обнаружить только в мочеполовых путях.

Источник инфекции – больной трихомонадной инфекцией или носитель вагинальных трихомонад.

Кроме полового, возможен вертикальный путь передачи – от больной матери ребенку во время беременности или родов.

У женщин вагинальная трихомонада вызывает цервицит, уретрит и вагинит. К проявлениям трихомониаза относятся выделения из половых путей с сильным неприятным запахом, болезненное мочеиспускание и генитальный зуд.

Для чего используется исследование?

• Чтобы установить причину воспалительного заболевания мочеполовой системы.
• Для дифференциальной диагностики инфекционных заболеваний урогенитального тракта у мужчин и женщин.
• Для профилактического обследования пациентов с высоким риском развития половых инфекций.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата

• Наличие вагинальной трихомонады.

Причины отрицательного результата

• Отсутствие трихомонадной инфекции (норма).

• При обнаружении трихомониаза у пациента следует обследовать его полового партнера и при необходимости провести антибактериальную терапию.
• В связи с высоким риском реинфекции через 3 месяца после лечения должен быть проведен повторный анализ.

Время выполнения анализа и расшифровка результатов

При диагностике трихомониаза важное значение имеет не только качество исследования, но и его скорость, так как пациент испытывает значительный физический дискомфорт. Время, которое потребуется на ожидание результатов лабораторного исследования, зависит от метода диагностики:

Получения результата исследования

Метод	Продолжительность диагностики
Серологическое исследование крови	1-2 дня
Генодиагностический с использованием ПЦР-технологии	6 часов
Культуральный на плотной питательной среде	5 дней
Микроскопия нативного мазка	1 час
Исследование окрашенного мазка	1-2 дня

Результат теста на трихомониаз может быть положительным или отрицательным. Отрицательный результат означает, что вагинальная трихомонада в биоматериале отсутствует, а болезненные симптомы вызваны другим возбудителем.

Положительный результат означает что человек инфицирован trichomonas vaginalis. Однако и в этом случае не исключено, что воспаление вызвано другим микроорганизмом. Для постановки максимально точного диагноза потребуются результаты нескольких параллельных исследований.

Видео о диагностике трихомониаза:

Результатом серологического исследования будет выявление в крови иммуноглобулинов G и M. Они считаются маркерами недуга. Обнаружение иммуноглобулинов М свидетельствует о первичном заражении и остром трихомониазе. Иммуноглобулины класса G говорят о хроническом недуге или повторном заражении.

Сколько стоит анализ на трихомониаз

Стоимость анализа на трихомониаз зависит от метода исследования и метода забора материала. Например, в Москве стоимость забора мазка из уретры или из влагалища — около 400 рублей. За взятие крови возьмут 150–200 рублей. А при сдаче мочи или спермы доплачивать не придется, стоимость контейнера обычно уже включена в цену исследования.

Микроскопия мазка будет стоить от 450 до 600 рублей в зависимости от лаборатории. ПЦР-исследование — 300–450 рублей вне зависимости от вида материала. Анализ на трихомониаз культуральным методом выполняется не во всех клиниках и стоит от 800 до 1300 рублей [24] . А серологическая диагностика трихомониаза по крови обойдется примерно в 600–800 рублей.

Лабораторные методы диагностики урогенитального трихомониаза

Лабораторная диагностика трихомониаза — обязательная составляющая при постановке диагноза урогенитальный трихомоноз.

Обзор освещает диагностические методы, направленные на выявление простейшего, антигенов T.vaginalis, специфических антител и ДНК возбудителя. Отражены существующие проблемы в интерпретации результатов и сведения об эффективности применения того или иного метода в алгоритме обследования пациентов.

Трихомониаз в структуре ИППП

Одно из центральных мест в структуре заболеваемости инфекциями, передающимися половым путем, занимает трихомоноз. Он широко распространен в странах Африки, Южной и Юго-Восточной Азии, а также в странах с большим притоком эмигрантов. В последние годы продолжается положительная тенденция к снижению уровня заболеваемости трихомонозом, однако отмечается рост скрытых и малосимптомных форм инфекции, затрудняющих своевременную диагностику трихомониаза и лечение [7,11].

Особенно распространен трихомоноз среди женщин [33], однако вопрос о значении T.vaginalis в патологии беременности остается открытым из-за противоречивости информации по этому вопросу [23,26]. Клиническая картина урогенитального трихомоноза характеризуется отсутствием специфических признаков и примерно у 50 % инфицированных трихомонозом имеет место бессимптомный характер течения заболевания, т.е. возможно трихомонадоносительство [49]. Недовыявление трихомонад — причина неконтролируемого их распространения среди сексуально активного населения. В результате это приводит к развитию хронических орхоэпидидимитов и простатитов у мужчин, а также хронических аднекситов у женщин, что в итоге может служить причиной бесплодия, невынашивания беременности, патологии новорожденных [25,29].

Трихомоноз имеет важное медицинское, социальное и экономическое значение не только из-за высокой распространенности инфекции, но и из-за доказанной роли T.vaginalis как кофактора ВИЧ-инфекции и рака шейки матки [33].

Сравнительный анализ лабораторных методов диагностики трихомониаза

Диагностика урогенитального трихомониаза основывается на обнаружении в исследуемом материале T.vaginalis. Диагноз не может быть поставлен исключительно на основании клинической картины, поскольку патогномоничные симптомы встречаются только у 2 % пациенток. Ещё в 1980 году были представлены результаты, свидетельствующие о том, что если диагноз трихомоноза устанавливать только на основании клинической картины, то 88 % инфицированных T.vaginalis женщин будет дан ложноотрицательный результат, а у 29 % неинфицированных диагноз был бы поставлен ошибочно [27]. В связи с тем, что клинические симптомы зачастую не отражают реальной картины заболевания, в обязательном порядке необходимо применение лабораторных методов диагностики трихомониаза, причем актуальна задача своевременного проведения исследования.

До настоящего времени в соответствии с протоколом ведения больных урогенитальным трихомониазом [14] основными методами обнаружения трихомонад являются микроскопический и культуральный, т.е. прямая идентификация возбудителя в мазке либо при культивировании на питательной среде. Но сложилась парадоксальная ситуация: при высоком уровне заболеваемости трихомонозом в России отсутствует производственный выпуск стандартных, разрешенных к применению препаратов и питательных сред для диагностики трихомониаза. В практике используют зарубежные среды, что влияет на стоимость исследования, или приготовленные по прописям в лабораториях, что влияет на воспроизводимость и достоверность получаемых результатов.

Диагностика трихомониаза существенно осложнилась в последние годы в связи с распространенностью нетипичных округлых форм T.vaginalis, обнаруживаемых при световой микроскопии витальных препаратов [3].

Роль микроскопического метода при постановке диагноза

Исторически микроскопия — это первый метод в лабораторной диагностике трихомоноза. Его использование экономически целесообразно в силу простоты и возможности одновременного просмотра мазка и на другие возбудители. Микроскопия может производиться в нативном препарате или в препарате, окрашенном по различным методикам. Нативный препарат необходимо исследовать в течение 10 минут после забора материала, поскольку утрачивается подвижность возбудителя, клетка округляется и получение однозначного результата затрудняется [30]. В положительных случаях микроскопии нативного препарата трихомонады обнаруживаются в виде грушевидной, овальной или округлой формы по величине несколько превосходящей лейкоциты [5]. Для подвижных форм характерны толчкообразные движения за счет жгутиков и ундулирующей мембраны, которые особенно хорошо видны при исследовании в микроскопе с темнопольным конденсором. Необходимо отличать подвижность T.vaginalis от подвижных жгутиковых представителей семейства Bodonidae. Подвижные бактерии, прикрепленные к лейкоцитам и создающие ложное впечатление движения, также вероятно ошибочно идентифицировать как крупную трихомонаду.

Микроскопия окрашенных препаратов несколько повышает процент выявления трихомонад по сравнению с нативными препаратами в силу того, что учитываются не только типичные жгутиковые, но и амастиготные формы. Кроме того окрашенные препараты можно использовать для косвенной оценки воспалительного процесса — скопление лейкоцитов на клетках плоского эпителия или вокруг них. Еще один косвенный признак урогенитального трихомоноза — наличие большого количества слизи в исследуемом материале [6]. Правда, с увеличением количества лейкоцитов в отделяемом из уретры у мужчин больных урогенитальным трихомонозом, вероятность получения ложноположительных результатов культуральным и микроскопическим методами увеличивается [12].

В препаратах, окрашенных метиленовым синим, трихомонады наблюдаются в виде округлой или овальной формы, расположенные в слизи между клеточными элементами. Четко просматривается оболочка паразитов, эксцентрично расположенное ядро, интенсивно окрашенное в синий цвет, протоплазма — светло-синяя, вакуоли — бесцветные. При таком способе окраски трихомонады имеют характерный вид и хорошо распознаются [8]. Для более детального просмотра клетки и выявления хорошо идентифицируемых жгутиков следует использовать дифференциальные методы окраски по Романовскому-Гимзе, Лейшману.

В целом микроскопия нативного препарата считается высокоспецифичным тестом (99,8 %), но имеет низкую чувствительность — от 38 % до 82 %. [1,10 ,17,48]. Во многом это связано с высокой долей субъективизма при визуальной оценке результатов.

Питательные среды для культурального исследования

В связи с низкой чувствительностью микроскопического метода и в соответствии с протоколом ведения больных урогенитльным трихомониазом [14] идентификацию T.vaginalis следует проводить культуральным методом, считающимся, по мнению большинства исследователей, «золотым стандартом».

Первое in vitro культивирование T.vaginalis было проведено в 1915 г [36]. С тех пор разработаны разные варианты жидких и полужидких питательных сред для диагностики трихомониаза: среда Джонсона-Трасселя (СPLM), Даймонд среда, модифицированная Даймонд среда с добавлением тиогликолята натрия, среда Купферберг STS, среда Купферберг Difco, среда InPouch TV, среда TYM.

Известна попытка создания бессывороточной питательной среды для культивирования трихомонад [35]. Была предложена синтетическая питательная среда, в которой лошадиная сыворотка была заменена на бычий сывороточный альбумин и холестерин, совместно либо с глицериновыми жирными кислотами, либо со смесью жирных кислот. Однако на такой модифицированной среде скорость роста и урожай T.vaginalis были низкими.

В 70-80-х годах прошлого века в отделе микробиологии ЦНИИКВИ была разработана модифицированная среда Джонсона-Трасселя — среда СКДС [5]. В состав этой среды входят: смесь гидролизата казеина и гидролизина или аминопептида, отходы фармацевтической промышленности при изготовлении лизоцима, ферментативный гидролизат биомассы микроорганизмов, а также экстракт кормовых дрожжей. Коммерчески среда СКДС не выпускается.

В настоящее время отечественные производители выпускают следующие готовые питательные среды: питательная среда для выявления влагалищных трихомонад (ООО «Диагност-Мед», г. Омск), основа питательной среды для культивирования трихомонад (НПО «Микроген», г. Махачкала) и питательная среда СВТ для визуальной диагностики трихомониаза (НИИЭМ имени Пастера, г. Санкт-Петербург).

Исследования, посвященные сравнению питательных сред, немногочисленны. Так, в США в 1989 г. были проведены сравнительные испытания питательных сред, используемых для культивирования T.vaginalis. В качестве посевного материала они использовали клинические образцы вагинальных секретов от больных трихомонозом [43]. Частота обнаружения на разных питательных средах была следующей: Даймонд среда (93,9 %), модифицированная Даймонд среда с добавлением тиогликолята натрия (92,3 %), среда Купферберг STS (38,5 %) и среда Купферберг Difco (49,2 %). Были отмечены высокие ростовые свойства питательной среды Даймонд и положительный эффект добавления. Авторы, однако, указывают на низкую селективность исследованных питательных сред в отношении дрожжеподобных грибов (в 32 % случаев наблюдался рост дрожжеподобных грибов).

В Англии в 1997 г было проведено сравнительное исследование чувствительности питательных сред InPouch TV, Diamond и Джонсона-Трасселя [21]. В 4 мл каждой из трех сред добавляли по 30 мкл инокулюма. Результат оценивали на первые, вторые и четвертые сутки. Было показано, что наибольшей чувствительностью обладает питательная среда InPouch TV (87 %) по сравнению с Diamond (60 %) и Джонсона-Трасселя (57 %).

Культуральная диагностика трихомониаза напрямую зависит от выпускаемых питательных сред. В оптимальном алгоритме лабораторной диагностики обязательной ступенью должно быть культуральное исследование, причем с использованием качественных стандартизированных питательных сред [9]. Этот вывод подтверждается исследованиями, проведенными в 1990 г в ЦНИКВИ [2], которые показали, что подавляющее число больных трихомонозом (72,8 %), как среди женщин, так и среди мужчин, были выявлены при использовании культурального метода.

Методы, основанные на выявлении антигенов

Использование иммунохимических методов обнаружения антигенов возбудителя, таких как иммуноферментный анализ (ИФА) и реакция иммунофлуоресценции (РИФ), особенно актуально в случаях невозможности проведения культурального исследования или при расхождении результатов культурального и микроскопического методов.

Было показано, что чувствительность РИФ ниже, чем культурального исследования, но выше микроскопии нативного препарата [44]. Однако эта во многом субъективная методика к тому же требует отдельной обработки каждого мазка и люминесцентного микроскопа. Одновременная обработка всех проб в планшете и автоматическая детекция цветовых продуктов ферментативной реакции исправили некоторые основные недостатки РИФ.

В работах 80-х годов ИФА давал соизмеримый с культуральным методом процент положительных результатов. Однако авторы указывали, что из-за очевидной гетерогенности изолятов T.vaginalis при описываемых ими условиях ни один из них не имеет моноклональных антител, способных связываться с антигенами в клинических образцах [31,47]. Использование в качестве антигена отдельных иммуногенных белков для получения моноклональных антител несколько изменило сложившееся представление, и была продемонстрирована возможность обнаружения почти 90 % из протестированных клинических изолятов с положительным ответом.

Кроме того, явное преимущество этого метода перед методом «золотого стандарта» — это отсутствие строгих температурных требований. Авторы отмечают, что, возможно, важным звеном в получении достоверного результата служит процедура получения клинического материала, и важно использовать для образца буферный раствор, вследствие того, что помещение организма в фосфатно-солевой буферный раствор позволяет ему освобождать антигенную детерминанту, необходимую для связывания с антителом. Из этого следует, что ранее приписываемая гетерогенность T.vaginalis может быть обусловлена недоступностью антигенных детерминант для антитела, а не отсутствием антигена на поверхности трихомонады [34].

Стоит подчеркнуть, что в России отсутствуют коммерческие разрешенные к применению ИФА и РИФ тест-системы для диагностики трихомониаза.

Диагностическая ценность серологического метода

Изучением иммунологии трихомоноза занимаются уже долгое время [3]. В литературе мало информации о природе иммунного ответа при трихомонозе, неизвестно влияние макро и микроорганизмов на наличие или отсутствие симптомов. Однако понятно, что природа этого механизма неоднозначна и многообразна [20].

Большая часть противотрихомонадных антител принадлежит к IgG-классу [37]. Тем не менее, в сыворотках больных женщин выявляют повышенное содержание специфических IgM, и IgA антител, а при остром трихомонозе в вагинальных смывах отмечается увеличение IgA [28]. Для определения противотрихомонадных антител у пациентов в разные годы пытались использовать реакцию связывания комплимента (РСК) [18], внутрикожную пробу [8], реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) [32, 37, 38], реакцию непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) [13].

В 1981 году для серодиагностики трихомоноза впервые был использован метод иммуноферментного анализа (ИФА). При использовании в качестве «подложки» цельноклеточного антигена чувствительность составила всего 80,4 % [45]. Позднее были предприняты попытки использовать в качестве антигена цистеиновые протеиназы T.vaginalis, поскольку предполагается, что они вовлечены в патогенез. Специфичность в этом случае составила 100 %, однако чувствительность не превысила 90 % [20, 46].

В России подобных работ не проводилось, и, по мнению наших исследователей, чувствительность метода составляет чуть более 30 %, и его использование может быть рекомендовано только в качестве вспомогательного теста [16]. Низкая эффективность серологических методов в диагностике трихомониаза связана также с тем, что антитрихомонадные антитела могут циркулировать в сыворотке крови в течение длительного времени после лечения, а значит, практически невозможно дифференцировать текущую и пролеченную формы заболевания [19].

Методы, основанные на выявлении нуклеиновых кислот. Методы генодиагностики на основе определения специфических нуклеотидных последовательностей (мишеней) ДНК возбудителя появились сравнительно недавно. Уже в 1992 Riley D. E. впервые сообщил об использовании ПЦР в диагностике трихомоноза [41]. В работе было показано, что этот метод при использовании электрофоретического способа регистрации результатов помогает выявлять от 10 до 100 трихомонад в исследуемом материале.

Чувствительность и специфичность ПЦР во многом обусловлена правильным выбором мишеней для амплификации [42]. В наибольшей степени исследованные локусы в геномах простейших — это гены рибосомальных РНК, отличающиеся мультикопийностью (254 копии 18S рРНК/на клетку T.vaginalis) [22]. Наряду с геном 18S pРНК исследован ген бета-тубулина T.vaginalis. Использование праймеров из этого гена обеспечивало чувствительность равную 98 % в сравнении с культуральным методом системы InPouch [39]. Вместе с тем, оценивая эффективность праймеров, следует учитывать генетически обусловленную внутривидовую вариабельность Т.vaginalis. Сравнение пяти наборов диагностических праймеров показало, что чувствительность ПЦР, в первую очередь, зависит от выбора праймеров и, в меньшей степени, от способа регистрации результата: иммуноферментный метод детекции продуктов ПЦР показал лучший результат, чем электрофорез в геле [24].

Согласно современным представлениям, применение метода ПЦР оправдано при диагностике латентного течения трихомоноза, для выявления Т.vaginalis при микст-инфекции урогенитального тракта, при скрининговых исследованиях (в комплексе с микроскопическим методом), а также для контроля качества микроскопического исследования. В целом, эффективность диагностики существенно повышается при использовании ПЦР в сочетании с культуральным и/или микроскопическими методами исследования.

Трихомониаз: лабораторная диагностика

Трихомониаз занимает первое место по распространенности среди заболеваний мочеполового тракта (и является частой причиной хронических воспалительных заболеваний мочеполовой сферы человека). Кроме того, трихомониаз держит первенство и среди заболеваний, передаваемых половым путем. По данным ВОЗ (1999) 10% населения земного шара болеют трихомониазом. Трихомониаз ежегодно вновь регистрируют у около 170 млн. человек. Венерологи считают, что трихомониаз получил широкое распространение по причине его неэффективного диагностирования урологами и главным образом гинекологами.

Основное место обитания трихомониаза в мужском организме — уретра, предстательная железа и семенные пузырьки, в женском — влагалище. Однако при первом попадании в организм трихомонады всегда вызывают уретрит. Заражение происходит половым путем при контакте с больным или носителем инфекции. Инкубационный период составляет 1 — 4 недели.

Симптомы заболевания у женщин: выделения из влагалища (обычно желтые, иногда с неприятным запахом), зуд и покраснение наружных половых органов, боль при мочеиспускании и при половых контактах. У мужчин заболевание в большинстве случаев протекает бессимптомно. Иногда при трихомониазе у мужчин возникают следующие симптомы: выделения из мочеиспускательного канала, боль при мочеиспускании. При поражении предстательной железы — симптомы простатита.

У мужчин трихомонады могут быть одной из причин бесплодия, в основе которого, как правило, поражение предстательной железы (ПЖ). Доказана роль трихомонад в развитии осложнений при беременности и в её неблагоприятном исходе, развитии бесплодия у женщин, в том числе вследствие сальпингитов, развившихся в детском возрасте. Установлено значение влагалищных трихомонад в увеличении риска заболевания ВИЧ-инфекцией и рака шейки матки.

Возбудитель урогенитального трихомониаза (трихомоноза) Trichomonas vaginalis — простейший одноклеточный паразит, по существующей систематике относится к царству высших процистов — Protozoa, классу жгутиковых — Flagella, семейству — Trichomonadidae, роду — Trichomonas. У человека могут обитать три вида трихомонад: Trichomonas tenax (ротовые), Trichomonas hominis (кишечные), Trichomonas vaginalis (влагалищные). Вопрос о самостоятельности каждого вида и его способности вызывать инфекционный процесс дискутировался длительное время. Однако господствующая в настоящее время точка зрения отводит роль инфекционного агента (патогена) исключительно Т. vaginalis.

Интересно, что в течение последних лет среди пациентов с урогенитальным трихомониазом увеличилась и частота выявления амастиготных форм влагалищных трихомонад — метаболически малоактивных особей паразита, лишенных органоидов движения, что значительно затрудняет диагностику инфекции и при отсутствии соответствующей терапии, способствует формированию трихомонадо-носительства у таких больных.

Диагностика урогенитального трихомониаза основывается на обнаружении в исследуемом материале T. vaginalis. Диагноз не может быть поставлен исключительно на основании клинической картины, поскольку патогномоничные симптомы встречаются только у 2 % пациентов. В лабораторной диагностике острого трихомоноза при наличии в исследуемом материале типичных форм паразитов микробиологические методы дают однозначно интерпретируемые результаты, тогда как хронический трихомоноз, обусловленный неподвижными округлыми трихомонадами, представляет определенные трудности и требует использования комплекса лабораторных методов.

Алгоритм лабораторной диагностики трихомониаза. На первом этапе выполняют микроскопию нативного мазка (НМ), которая позволяет в ряде случаев (при остром процессе) быстро выявить живых подвижных трихомонад (ввиду того, что при длительном пребывании препарата при комнатной температуре трихомонады теряют подвижность, исследование необходимо проводить как можно быстрее после получения материала), при отрицательном результате НМ используют обладающий высокой специфичностью культуральный метод (КМ), дополненный ПЦР (наиболее оптимально) или окрашенным мазком (ОМ), или реакцией иммунофлуоресценции (РИФ). Преимуществом исследования трихомонад в окрашенных препаратах является возможность исследования их спустя длительное время после взятия материала. Информативность этого метода в диагностике трихомониаза выше, так как определяются не только подвижные формы, но и неподвижные. Положительные результаты КМ и/или ПЦР оцениваются как лабораторный диагноз урогенитального трихомониаза. Более осторожно следует трактовать положительный ответ ОМ, помня о возможности ложноположительных ответов; его оценка должна проводиться с учетом клинической картины, данных обследования полового партнера.

Дополнительное лабораторное тестирование эндоцервикальных аспиратов у женщин с хроническими воспалительными заболеваниями органов малого таза и секрета простаты у мужчин с хроническим простатитом (после 2 — 3 сеансов дренирующих процедур) повышает выявляемость трихомонад на 15 и 12% соответственно.

При обобщении данных отечественных и зарубежных авторов по диагностической чувствительности разных методов выявления трихомонад, выполненных одновременно в сравнительных исследованиях, можно заключить, что чувствительность культурального метода составляет величину порядка 40 — 90%, ПЦР — 55 — 95% и микроскопии (влажного или окрашенного мазка) — 30 — 70%.

Следует отметить, что высокая чувствительность метода ПЦР сопровождается недостаточной воспроизводимостью результатов. С разной частотой имеют место ложноотрицательные ответы, что возможно как из-за технических погрешностей, например недостаточной очистки ДНК-мишени и ингибирования ПЦР, так и из-за вариабельности генома-мишени T. vaginalis. Данная проблема может быть разрешена путем подбора и применения наиболее эффективных праймеров.

Согласно современным представлениям, применение метода ПЦР оправдано при диагностике латентного течения трихомоноза, для выявления Т.vaginalis при микст-инфекции урогенитального тракта, при скрининговых исследованиях (в комплексе с микроскопическим методом), а также для контроля качества микроскопического исследования. В целом, эффективность диагностики существенно повышается при использовании ПЦР в сочетании с культуральным и/или микроскопическими методами исследования.

В связи с низкой чувствительностью микроскопического метода и в соответствии с протоколом ведения больных урогенитльным трихомониазом идентификацию T. vaginalis следует проводить культуральным методом, считающимся, по мнению большинства исследователей, «золотым стандартом». В оптимальном алгоритме лабораторной диагностики обязательной ступенью должно быть культуральное исследование (выращивание на питальных средах отделяемого из уретры, влагалища, секрета простаты и спермы), причем с использованием качественных стандартизированных питательных сред.

Использование иммунохимических методов обнаружения антигенов возбудителя, таких как реакция иммунофлуоресценции (РИФ) и иммуноферментный анализ (ИФА), особенно актуально в случаях невозможности проведения культурального исследования или при расхождении результатов культурального и микроскопического методов.

В качестве вспомогательных диагностических тестов предложены различные способы иммунодиагностики трихомониаза. М. Cogne с соавт. (1985) был предложен ELISA-тест для выявления сывороточных (IgG) и секреторных (IgA) противотрихомонадных антител. При сравнении этого метода с реакциями иммунофлуоресценции и гемагглютинации он оказался более чувствительным и специфичным, однако был положительным в 100% случаев у больных с ранее перенесенным заболеванием, что затрудняло его использование в качестве диагностического критерия без бактериологического подтверждения трихомониаза. Одно из новых направлений в диагностике трихомониаза — применение для детекции трихомонад варианта капиллярной жидкостной хроматографии, позволяющего в течение 10 мин выявить T. vaginalis с чувствительностью 83,3% и специфичностью 98,8%.

Тип биоматериала и способы взятия:

Тип БМ	В отделении МЛ «ДІЛА»	На дому	В ЛПЗ	Самостоятельно
Моча	В отделении МЛ «ДІЛА»	На дому	В ЛПЗ	Самостоятельно
Секрет простаты	В отделении МЛ «ДІЛА»	На дому	В ЛПЗ	Самостоятельно
Эякулят	В отделении МЛ «ДІЛА»	На дому	В ЛПЗ	Самостоятельно
Урогенитальный соскоб (мужской)	В отделении МЛ «ДІЛА»	На дому	В ЛПЗ	Самостоятельно
Урогенитальный мазок (женский)	В отделении МЛ «ДІЛА»	На дому	В ЛПЗ	Самостоятельно

Описание анализа

Трихомониаз (антитела IgG) – анализ, определяющий, есть ли в крови антитела класса G, вырабатывающиеся в ответ на инфицирование трихомонадой – микроорганизмом, представителем группы простейших.

Трихомонады (Trichomonas vaginalis) провоцируют развитие трихомониаза, болезни, передающейся половым путем. Возможно заражение и бытовым путем, но с учетом того, что трихомонада вне человеческого организма способна выжить лишь в течение примерно часа, такое происходит крайне редко. Заражаются представители обоих полов, но у мужчин симптомы болезни, в отличие от женщин, почти никогда не появляются.

При трихомониазе женщины жалуются на покраснение и зуд в области половых органов, болезненное мочеиспускание, появление серых или желтоватых пенистых выделений, и болевые ощущения во время полового акта. Примерно у половины инфицированных женщин отсутствуют проявления болезни. Вне зависимости от того, присутствуют ли симптомы, инфекция способна вредить беременным, провоцируя преждевременные роды.

Мужчины, в большинстве случаев, являются бессимптомными носителями трихомонады, однако изредка возможны жалобы на слабое жжение при эякуляции или мочеиспускании, воспаление уретры, незначительные выделения из неё.

Организм зараженного с возбудителем трихомониаза борется, вырабатывая специальные иммуноглобулины – антитела. Они бывают нескольких типов, но для лабораторной диагностики трихомониаза наиболее важны антитела класса G (IgG), которые сохраняются в крови дольше всех остальных, гарантируя более длительную защиту от инфекции. Однако, пожизненный иммунитет против трихомонады не формируется.

Интерпретация результатов

Полученные результаты отображаются в индексе позитивности:

• если значение индекса менее 0.9 – анализ отрицательный (трихомониаза у пациента нет, либо с момента заражения прошел слишком малый срок для выработки антител);
• значение в пределах 0,9-1,09 – результат сомнительный, требуется пересдача анализа;
• если значение 1,1 и более – результат положительный (у пациента выявлены антитела IgG к трихомонаде, что указывает на существующую или перенесенную инфекцию).

Подготовка к обследованию: не требуется.

Материал для исследования: венозная кровь.

Метод исследования: иммуноферментный анализ (ИФА).

Срок проведения исследования: 2 рабочих дня.

Показания к назначению анализа на трихомониаз

Трихомониаз не всегда вызывает клинически выраженное заболевание. У женщин до половины случаев заражения могут протекать бессимптомно. И выявляется это заболевание уже при обследовании по поводу осложнений — бесплодия, невынашивания беременности, сальпингоофорита, эндометрита [8] . Трихомонады увеличивают риск заражения ВИЧ-инфекцией и риск развития рака шейки матки [9] .

Из-за трихомониаза в половых путях и в уретре развивается воспалительная реакция, появляются микроскопические кровоизлияния. Это нарушает естественный защитный барьер и делает организм более восприимчивым к любым другим инфекциям. Лейкоциты и другие иммунные клетки мигрируют в очаг поражения, где создается их большая концентрация. А именно эти клетки в первую очередь поражает ВИЧ-инфекция. И от того, насколько высока их концентрация в месте соприкосновения с вирусом, зависит вероятность заражения [10] .

Симптомы трихомониаза у женщин — болезненность и дискомфорт внизу живота, которые усиливаются при половых контактах или при мочеиспускании. Появляются выделения желтоватого цвета из половых путей. Часто эти выделения имеют пенистый вид и неприятный запах.

У мужчин появляются слизистые выделения из уретры, боль во время мочеиспускания и половых контактов. Основными осложнениями этой инфекции для мужчин являются простатит и везикулит [11] . В одном из исследований было доказано, что именно трихомонада стала причиной хронического простатита у 29% пациентов [12] .

Российское общество дерматовенерологов и косметологов советует проводить диагностику трихомониаза [13] :

• при воспалительных урологических и гинекологических заболеваниях;
• при обследовании партнеров во время планирования беременности;
• во время самой беременности;
• перед урологическими и гинекологическими операциями;
• при бесплодии;
• после незащищенного полового контакта.

Методы лабораторной диагностики трихомониаза

Для выявления трихомонады используют четыре типа методов: микроскопический, культуральный, молекулярно-генетический и серологический. Для того чтобы установить диагноз, достаточно обнаружить этот микроорганизм хотя бы одним из первых трех методов [14] .

Микроскопия — это выявление трихомонады в мазках. Биологический материал наносят на предметное стекло и исследуют его под микроскопом.

В первый час после взятия материала исследуют нативный или «влажный» мазок, то есть материал без окраски. В нем можно выявить подвижные клетки трихомонады. Этот метод особенно эффективен при остром заболевании. В этом случае его чувствительность достигает 70%, а специфичность — 100% [15] . Если прошло больше времени с момента взятия биоматериала или заболевание протекает в скрытой форме, то шанс найти подвижные клетки гораздо меньше, в среднем от 30 до 70% [16] .

Кроме исследования влажного мазка материал могут обрабатывать различными красителями. В этом случае врач ищет под микроскопом клетки определенного размера со специфической окраской и формой.

Для диагностики трихомониазной инфекции есть свой «золотой стандарт». Это микробиологическое исследование , при котором биоматериал помещают на питательную среду (посев).

Этот метод применяют, когда заболевание не сопровождается ярко выраженными симптомами [17] . Его также используют как второй этап диагностики, если микроскопический метод не дал результата. Чувствительность этого метода достигает 95% [18] . Из минусов можно отметить длительность исследования.

Молекулярно-генетические методы — это различные виды ПЦР, NASBA и других реакций, которые выявляют участки ДНК или РНК в биоматериале. ПЦР обладает меньшей чувствительностью, чем культуральный метод, порядка 88–97% [19] . А по некоторым данным — от 55 до 95% [20] .

ПЦР желательно применять вместе с культуральным исследованием. Это значительно повышает вероятность выявления болезнетворного микроорганизма.

Серологическое исследование , то есть определение в крови антител к трихомонаде, используется как дополнение к первым трем методам. Если коротко, то сдать анализ крови на трихомониаз можно, но его результаты нужно оценивать только комплексно с учетом других исследований.

Его недостатком является возможность ложных положительных и ложноотрицательных реакций. Из положительных моментов — антитела сохраняются длительное время, около 1 года после заражения [21] . То есть даже спустя год можно определить, что человек перенес трихомониаз.

Подготовка к исследованию и забор биоматериала

Для определения уровня антител понадобится кровь, для проведения всех остальных исследований чаще всего берут соскоб из уретры. У женщин также могут брать материал из влагалища или из цервикального канала — здесь концентрация трихомонад будет самая высокая.

Мужчинам перед взятием анализа на трихомониаз нужно не мочиться около двух–трех часов. Для женщин правил несколько больше. Обследование не проводится во время месячных или накануне, после кольпоскопии или вагинального УЗИ. За 1–2 дня до обследования желательно не использовать свечи, спринцевания и воздержаться от половых актов. Все эти процедуры нарушают состав микрофлоры, и исследование может получиться неточным.

Для проведения ПЦР кроме соскоба можно использовать первую порцию утренней мочи или сперму. Собрать сперму или мочу нужно в специальный стерильный контейнер.

Сколько времени делается анализ на трихомониаз и как расшифровать результаты

Из всех анализов на трихомониаз самый быстрый — микроскопия нативного мазка. В идеале она должна проводиться через 10 минут после взятия материала. За это время трихомонады не успевают потерять свою подвижность и сохраняют типичную форму [22] . То есть уже примерно через час врач может дать предварительный результат.

В реальности такое возможно в гинекологических или урологических клиниках, при которых есть своя лаборатория с возможностью проводить микроскопическое исследование.

Окрашенные мазки не требуют такой срочности анализа. Поэтому результат будет готов на следующий день или через день.

Результаты ПЦР-исследования обычно можно получить через 1–2 рабочих дня. При обнаружении трихомонад результат могут задержать для постановки подтверждающих проб. Положительный результат выдают при обнаружении этих микроорганизмов, отрицательный — при их отсутствии.

Диагностика трихомониаза культуральным методом — самая долгая. Она может занимать более недели. За это время исследуемый материал помещают на питательную среду, следят за ростом микроорганизмов на ней, проводят повторное определение возбудителя. Идеальный вариант — отсутствие роста. Это означает, что в собранном материале не было живых трихомонад. Если, конечно, были точно соблюдены все требования по забору биоматериала, его хранению и транспортировке. Положительный результат анализа на трихомониаз говорит о заражении.

Анализ крови на трихомониаз проводится в течение 1–2 рабочих дней. Положительный результат говорит о том, что в крови есть антитела, то есть пациент или болеет трихомониазом, или перенес его в прошлом. Отрицательный результат — отсутствие заболевания или низкий уровень антител. Сомнительный — это пограничный результат, который сложно интерпретировать. В таком случае обычно рекомендуют повторить исследование через 1–1,5 недели.